本研究通過組織培養(yǎng)，對葉下珠進(jìn)行芽的誘導(dǎo)、增殖、生根和煉苗移栽等，建立了一套完整的葉下珠組培快繁體系，為葉下珠大規(guī)模繁殖提供技術(shù)參考。

  1 材料與方法

  1.1 材料

  福建省廈門市福建省亞熱帶植物研究所內(nèi)種植的葉下珠Phyllanthus urinaria。

  1.2 方法

  1.2.1 培養(yǎng)條件 基本培養(yǎng)基為 MS，瓊脂 7.5 g·L-1，蔗糖為 30 g·L-1，pH 5.8～6.0。培養(yǎng)溫度(25 ± 1) ℃，光照時間12 h·d -1，光照強(qiáng)度1000～1500 lx。

  1.2.2 外植體接種 選取長勢均勻的葉下珠植株，用剪刀剪取位于植株中部的莖段，去除葉片與假葉柄。加1～2滴洗潔精將莖段表面洗刷干凈，流水沖洗5～6 h。于超凈工作臺上用75%酒精浸泡30 s，然后用0.1%升汞消毒13 min，無菌水沖洗5～6次，并用無菌濾紙擦干，置于接種盤上。用手術(shù)刀將外植體切成1.5～2 cm帶節(jié)莖段，生物學(xué)頂端朝上接種于培養(yǎng)基上。

  1.2.3 生長調(diào)節(jié)劑配比試驗 將消毒外植體接種到按單因素多水平設(shè)計的不同生長調(diào)節(jié)劑配比的、添加0.5 g·L-1活性炭的MS培養(yǎng)基中，共計7組，分別為：IBA為0.2 mg·L-1，6-BA分別為1.0、1.5、2.0、3.0 mg·L-1;6-BA 為 1.5 mg·L-1，IBA 分別為 0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1 (表 1)。每組 15 瓶，每瓶接 1個外植體，每3 d觀察1次，15 d統(tǒng)計誘導(dǎo)情況。

  1.2.4 誘導(dǎo)培養(yǎng)基 得出芽誘導(dǎo)佳生長調(diào)節(jié)劑配方后，對比添加0.5 g·L-1活性炭的MS和1/2MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果，共2組，每組24瓶，每瓶接1個外植體，每4 d觀察1次，20 d后統(tǒng)計誘導(dǎo)情況。

  1.2.5 不同濃度6-BA對葉下珠芽的處理 將莖段誘導(dǎo)出的芽在超凈工作臺上切成1.5～2 cm帶芽莖段，接種至添加不同濃度6-BA的培養(yǎng)基中，共計3組，每處理5瓶，每瓶2個，即每處理10個外植體，每5 d觀察1次，25 d后統(tǒng)計芽增殖情況。

  1.2.6 不同濃度NAA與IBA對叢生芽的處理 將增殖擴(kuò)繁的叢生芽在超凈工作臺上分成單個芽，接種至添加蔗糖20 g·L-1的不同培養(yǎng)基中，共計6組，每處理5瓶，每瓶10個芽，即每處理50個芽，每5 d觀察1次，25 d后統(tǒng)計生根、長勢情況。

  1.2.7 煉苗 將生根的瓶苗轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)室外進(jìn)行煉苗，處理時間設(shè)置見表5。煉苗后清水洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至加水拌成泥狀的菜園土基質(zhì)。栽培條件：自然光，氣溫25～30 ℃。移栽15 d后統(tǒng)計成活率。

  2 結(jié)果與分析

  2.1 不同生長調(diào)節(jié)劑配比對葉下珠芽誘導(dǎo)的影響

  從表1可知，不同濃度生長調(diào)節(jié)劑配比對葉下珠莖段誘導(dǎo)芽的影響效果不同。當(dāng)IBA為0.2 mg·L-1時，誘導(dǎo)率先是隨6-BA濃度升高而升高，當(dāng)6-BA濃度達(dá)2.0 mg·L-1后，呈現(xiàn)出隨6-BA濃度升高而降低的趨勢。當(dāng)6-BA為1.5 mg·L-1時，誘導(dǎo)率隨IBA濃度升高呈降低的趨勢。當(dāng)6-BA為2.0 mg·L-1，IBA 為 0.2 mg·L-1時，誘導(dǎo)率高，達(dá)到81.82%，芽的平均長度長，達(dá)到1.00 cm，故該配比可作為適宜的葉下珠莖節(jié)誘導(dǎo)芽生長調(diào)節(jié)劑配比。

  表1 生長調(diào)節(jié)劑對葉下珠芽誘導(dǎo)的影響