1 材料與方法

  1.1 無菌體系的建立

  材料為多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua，取福建農業科學院藥用植物中心收集的野生多花黃精資源，剝取帶芽根莖，剝離葉包片，流水沖洗2 h，分不同消毒時間和消毒劑量處理，經表面消毒后，切成0.5 cm長的莖尖組織接種到MS培養基中，25±1 ℃，遮光處理。

  1.2 多花黃精莖尖誘導分化

  將沒有污染的多花黃精外植體轉接到誘導分化培養基中，25±1 ℃，光照1 500 Lx，時間10 h。

  1.3 BA對多花黃精增殖系數的影響

  將誘導分化的多花黃精莖尖從誘導分化培養基轉移到不同BA激素組合的繼代與增殖的培養基中，確定佳的BA濃度，25±1 ℃，光照1 500 Lx，時間10 h。

  2 結果與分析

  2.1 不同消毒組合對無菌苗建立的影響

  為了確定多花黃精莖尖無菌苗建立佳的消毒方式和消毒時間，因兩種不同濃度的HgCl2和消毒時間設置了8種消毒組合，重復三次。接種30 d后，觀察統計污染個數、萌芽個數、死亡個數(見表1)。從表中可以發現0.1%HgCl2浸泡5 min污染率高，高達85%，沒有得到滿意效果，隨消毒時間增加污染率明顯下降，達到30%，表明消毒時間過短不利于外植體的存活。在20 min消毒時間下，多花黃精污染率還是偏高，這表明一般情況下的0.1%HgCl2不能滿足其消毒，故選擇加大濃度用0.2%HgCl2來提高外植體的成活率。對比兩種濃度，在0.2%HgCl2下污染率明顯下降，在20 min時污染率低，此時存活率卻不是高，因為高濃度長時間的消毒，對外植體的毒害作用強;在15 min時，污染率低存活率高，滿足多花黃精的外植體消毒，達到兩者之間的一個平衡。

  表1 不同消毒組合對無菌苗建立的影響

  注：污染率=污染的個數/接種的總個數×100%，存活率=存活個數/接種的總個數×100%

  2.2 不同的生長調節劑組合對多花黃精分化的影響

  為確定更適合多花黃精分化的生長調節劑，比較了BA，IBA，KT在濃度10 mg·L-1時的分化率，其中保持NAA濃度在0.2 mg·L-1，設計了表2的試驗方案，每組合接種20個，30 d后觀察統計，重復三次試驗。

  表2 不同的生長調節劑組合對多花黃精分化的影響

分化率=分化個數/接種個數*100%

  從表2中可以看出，在這幾種培養基中，添加了BA的分化率明顯比未加BA分化率高，其分化率分別達到：85%，80%，75%，其他兩種生長調節劑所產生的分化率要低于BA所達到的分化率。多花黃精所分化的生長調節劑要明顯高于其他的材料，需要高濃度，這與其他研究者發現不同。需要高濃度的外源激素來刺激多花黃精的分化，通過高滲透來提高其分化，這將為下一步的研究作出明確方向。見圖1。

  圖1 多花黃精的誘導分化

  2.3 BA對多花黃精叢生芽增殖系數的影響

  通過對多花黃精分化的生長調節劑選擇可以看出BA對多花黃精分化具有明顯的作用，在其增殖過程中著重考慮BA的影響，而初步試驗中得到BA低濃度時多花黃精不能分化，因此采取高濃度的BA，故做了表3中的設計方案。每瓶接種1個芽，接種10瓶，一個月后統計叢生芽的個數，觀察統計增殖系數，重復三次。

  表3 BA對多花黃精增殖系數的影響

  增殖系數=繼代時叢生芽個數/接種時叢生芽個數

  從表3中可以看出，BA濃度在10 mg·L-1～60 mg·L-1范圍內，高濃度的BA均能有較好誘導增殖，BA濃度為40 mg·L-1達到佳，增殖系數達到2.8，在BA濃度為60 mg·L-1時增殖系數低，為1.6，相對也有不錯的增殖率。在一定高濃度范圍內，隨著BA濃度的提高，莖尖增殖系數隨著增加，BA濃度增至40 mg·L-1時，增殖系數大。從表現性狀上看，高濃度的BA對多花黃精芽分化起著很重要的作用。為何需要如此高濃度，其中機理需要進一步的研究。見圖2。

  圖2 BA對多花黃精增殖的影響

  3 討論

  在多花黃精離體培養初步研究過程中發現，福建多花黃精的無菌體系建立存在困難，在10 d后還會出現內生菌，這給外植體消毒帶來難度，高濃度長時間消毒不利于外植體的存活，過低時又不能得到高存活率。究其原因，可能是因為材料取源于野生種源，在材料本身中存在著內生菌。另外，消毒過程中的切割也得，避免其所產生的黏液。

  在多花黃精增殖過程中，高濃度的BA會提高多花黃精的增殖系數，這個與已見報道的不一樣，通過莖尖切片在低濃度的BA和2，4-D作用下誘導產生愈傷組織，愈傷組織分化后產生新植株。本文采取的是高濃度直接在塊根上刺激潛伏芽重新分化成新的植株，經初步試驗中低濃度對潛伏芽重新萌芽作用不大，高濃度的BA有利于潛伏芽的分化，可以在栽培過程中進行前處理，有可能擴大多花黃精栽培萌芽率。目前在探索如何降低高濃度的BA，以期能夠在快速繁殖過程中得到擴繁，有益于工廠化生產。