組培苗在培養過程中容易受微生物污染，污染直接影響生產成本及效率，打亂生產計劃，因此，減少培養環境的微生物污染對降低組培室的污染率至關重要，空氣消毒是切斷微生物傳播途徑，將污染降低的有力措施。中草藥在我國擁有著悠久的歷史，是我國醫學上的珍寶，中藥功效各異，抗菌消炎是其中的重要功效之一，中草藥煙熏消毒是古時流行的一種空氣消毒方法。隨著環保意識觀念的增強，近年來人們在對消毒制劑的選擇上越來越傾向于天然、無不良反應、消毒效果強的中草藥，將中草藥用于組培室的空氣消毒少有報道，但在各大醫院消毒中卻時常有報道，可見中草藥在空氣消毒方面有其獨特的效果。本研究利用4種中草藥艾葉、大青葉、訶子及連翹對組培室進行熏蒸消毒，從品種、用量及熏蒸時間3個方面探索中草藥對培養室空氣消毒的效果，旨在克服常規消毒方法的不足，開辟綠色健康、安全可靠的組培室空氣消毒新技術、新方法，為中草藥在組培室空氣消毒中的應用及發展提供理論依據和技術參考。

  1 材料與方法

  1.1 試驗材料供試材料艾葉、大青葉、訶子、連翹購買于中藥房。試劑與儀器：95%乙醇、MS培養基、瓊脂、恒溫培養箱、分析天平、超凈工作臺、培養皿、燒杯、滅菌鍋、托盤、打火機、量筒、pH試紙、鑷子。

  1.2 試驗方法

  1.2.1試驗材料的處理 艾葉可直接點燃;大青葉和訶子及連翹須與95%乙醇按1∶2的比例密閉浸泡24h備用。

  1.2.2 試驗場所 本試驗以百色學院化生樓組培室為消毒對象，組培室大小為92.48m3。在使用4種中草藥對組培室進行試驗時室內溫度、相對濕度均相同。在進行中草藥熏蒸試驗前將組培室打掃干凈，關閉組培室門窗，除操作人員外，其他人員禁止入內。

  1.2.3 采樣方法 將9個直徑為95mm含有MS培養基的平板放置在組培室的各個角落及中間位置，打開培養皿蓋使平板暴露在空氣中采用自然沉降法收集空氣中菌落數，采樣時間為30min，采樣期間禁止人員走動。將消毒前后采樣的平板置于30℃恒溫培養箱中培養72h后觀察培養皿中菌落數，并做好實驗記錄。采樣前后用75%酒精擦拭雙手，避免手上所帶菌落污染平板，影響試驗結果。

  1.2.4 不同中草藥熏蒸對組培室消毒效果影響 本試驗使用培養基為組織培養常用MS培養基。艾葉、大青葉、訶子、連翹4種中草藥的用量均為2.0g/m3。試驗期間不能使用其他消毒劑或物理方法對組培室進行消毒。試驗前根據試驗用量及處理方式準備好藥品。將中草藥置于托盤中在組培室中分5個點燃燒，使中藥中的有效成分揮發至空氣中，熏蒸1h后取樣，以熏蒸前30min采樣為對照，每組試驗重復4次，用平均滅菌率比較滅菌情況，從中篩選出消毒效果佳的中草藥。

  1.2.5 適中草藥用量及適消毒時間的確定 將篩選出的佳消毒效果中藥進行適中草藥用量及適消毒時間試驗，試驗用量分別為1.0g/m3、2.0g/m3和3.0g/m3，消毒時間按煙熏后0.5h、1h、1.5h、2h的時間分別進行采樣，以熏蒸前30min采樣為對照，每組試驗重復4次，用平均滅菌率比較滅菌情況。

  1.3 菌落的檢測與統計菌落檢測：在觀察結果時，根據菌落外觀按霉菌、細菌進行菌落的分類。

菌落統計：統計好試驗前后各培養皿菌落數，根據奧氏公式分別計算熏蒸前和熏蒸后組培室空氣中的含菌量。